Mga produkto

Ang paraan kung saan ang mga epekto ng sabay-sabay na mutasyon ay pinagsama upang baguhin ang aktibidad ng enzymatic ay hindi madaling mahulaan dahil ang mga epektong ito ay hindi palaging additive sa isang linear na paraan.Samakatuwid, ang pagkilala sa mga epekto ng sabay-sabay na mutasyon ng mga residue ng amino acid na nagbubuklod sa substrate ay maaaring gumawa ng isang makabuluhang kontribusyon sa pag-unawa sa pagtitiyak ng substrate ng mga enzyme.Sa beta-glycosidase mula sa Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), ang parehong mga nalalabi na Q39 at E451 ay nakikipag-ugnayan sa substrate at ito ay mahalaga para sa pagtukoy ng pagtitiyak ng substrate.Ang mga dobleng mutants ng Sfbetagly (A451E39, S451E39 at S451N39) ay inihanda ng mutagenesis na nakadirekta sa site, na ipinahayag sa bakterya at nilinis gamit ang affinity chromatography.Ang mga enzyme na ito ay nailalarawan gamit ang p-nitrophenyl beta-galactoside at p-nitrophenyl beta-fucoside bilang mga substrate.Ang k cat/Km ratio para sa single at double mutants ng Sfbetagly na naglalaman ng site-directed mutations sa mga posisyon Q39 at E451 ay ginamit upang ipakita na ang epekto sa libreng enerhiya ng ESdouble dagger (enzyme-transition state complex) ng double mutations (Gdouble daggerxy) ay hindi ang kabuuan ng mga epekto na nagreresulta mula sa iisang mutations (Gdouble daggerx at Gdouble daggery).Ang pagkakaibang ito sa Gdouble dagger ay nagpapahiwatig na ang mga epekto ng iisang mutasyon ay bahagyang nagsasapawan.Kaya, ang karaniwang epektong ito ay binibilang nang isang beses lamang sa Gdouble daggerxy.Ang crystallographic data sa beta-glycosidases ay nagpapakita ng pagkakaroon ng bidentate hydrogen bond na kinasasangkutan ng mga residue Q39 at E451 at ang parehong hydroxyl group ng substrate.Samakatuwid, ang parehong thermodynamic at crystallographic na data ay nagmumungkahi na ang mga nalalabi na Q39 at E451 ay nagsasagawa ng magkaparehong impluwensya sa kani-kanilang mga pakikipag-ugnayan sa substrate.