Mga produkto

Ang oxidative na pinsala sa mga base ng DNA ay karaniwang nagreresulta sa pagbuo ng mga oxidized purine, partikular na ang 7,8-dihydro-8-oxoguanine (8-oxoG) at 7,8-dihydro-8-oxoadenine (8-oxoA), ang dating ay isang well- kilalang mutagenic lesion.Dahil ang 8-oxoG ay madaling napapailalim sa karagdagang oksihenasyon kumpara sa mga normal na base, ang pagpasok ng isang base sa panahon ng DNA synthesis sa tapat ng isang oxidized form ng 8-oxoG ay sinisiyasat sa vitro.Ang isang sintetikong template na naglalaman ng isang solong 8-oxoG lesyon ay unang ginagamot sa iba't ibang one-electron oxidants o sa ilalim ng singlet oxygen na kondisyon at pagkatapos ay sumailalim sa primer extension na catalyzed ng Klenow fragment exo- (Kf exo-), calf thymus DNA polymerase alpha (pol alpha). ) o human DNA polymerase beta (pol beta).Alinsunod sa mga nakaraang ulat, ang dAMP at dCMP ay piling ipinapasok sa tapat ng 8-oxoG kasama ang lahat ng tatlong DNA polymerases.Nang kawili-wili, ang oksihenasyon ng 8-oxoG ay natagpuan na mag-udyok ng dAMP at dGMP na pagpasok sa tapat ng sugat ng Kf exo- na may lumilipas na pagsugpo ng primer extension o nagaganap sa site ng binagong base.Higit pa rito, ang sugat ay bumubuo ng isang bloke sa panahon ng synthesis ng DNA ng pol alpha at pol beta.Ang mga eksperimento sa isang 8-oxoA-modified template na oligonucleotide ay nagpapakita na parehong 8-oxoA at isang oxidized na anyo ng 8-oxoA na direktang pagpapasok ng dTMP ng Kf exo-.Ang mass spectrometric analysis ng 8-oxoG-containing oligonucleotides bago at pagkatapos ng oxidation na may IrCl62-ay pare-pareho sa oksihenasyon ng pangunahin sa 8-oxoG site, na nagreresulta sa pagbuo ng guanidinohydantoin moiety bilang pangunahing produkto.Walang nakuhang ebidensya para sa pagbuo ng mga abasic na site.Ang mga resultang ito ay nagpapakita na ang isang oxidized na anyo ng 8-oxoG, posibleng guanidinohydantoin, ay maaaring magdirekta ng maling pagbabasa at maling pagpasok ng mga dNTP sa panahon ng DNA synthesis.Kung nangyari ang ganoong proseso sa vivo, ito ay kumakatawan sa isang point mutagenic lesion na humahantong sa G-->T at G-->C transversions.Gayunpaman, ang kaukulang oxidized form ng 8-oxoA ay pangunahing nagpapakita ng tamang pagpasok ng T sa panahon ng DNA synthesis kasama ang Kf exo-.