Mga produkto

Ang ORF45 na protina ng Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) ay isang gammaherpesvirus-specific immediate-early tegument protein.Ang aming mga nakaraang pag-aaral ay nagsiwalat ng mga mahahalagang tungkulin nito sa parehong maaga at huli na mga yugto ng impeksyon sa KSHV.Sa pag-aaral na ito, sinuri namin ang interactome ng ORF45 gamit ang isang panel ng monoclonal antibodies.Bilang karagdagan sa naunang natukoy na extracellular regulated kinase (ERK) at p90 ribosomal S6 kinase (RSK) na mga protina, natagpuan namin ang ilang iba pang mga copurified na protina, kabilang ang mga kilalang ∼38 kDa at ∼130 kDa.Inihayag ng mass spectrometry na ang 38-kDa protein ay viral ORF33 at ang 130-kDa protein ay cellular USP7 (ubiquitin-specific protease 7).Na-map namin ang ORF33-binding domain sa mataas na conserved carboxyl-terminal 19 amino acids (aa) ng ORF45 at ang USP7-binding domain sa naiulat na consensus motif sa gitnang rehiyon ng ORF45.Gamit ang immunofluorescence staining, naobserbahan namin ang colocalization ng ORF45 na may ORF33 o USP7 kapwa sa ilalim ng mga nailipat na condit ions at sa mga cell na nahawaan ng KSHV.Bukod dito, napansin namin ang ORF45 na umaasa sa relocalization ng isang bahagi ng ORF33/USP7 mula sa nucleus hanggang sa cytoplasm.Nalaman namin na ang ORF45 ay nagdulot ng pagtaas sa akumulasyon ng protina ng ORF33 na inalis kung ang alinman sa ORF33- o USP7-binding domain sa ORF45 ay tinanggal.Higit pa rito, ang pagtanggal ng conserved carboxyl terminus ng ORF45 sa KSHV genome ay lubhang nabawasan ang antas ng ORF33 na protina sa mga cell na nahawaan ng KSHV at inalis ang produksyon ng mga progeny virion.Sama-sama, ang aming mga resulta ay hindi lamang nagpapakita ng mga bagong bahagi ng ORF45 interactome, ngunit nagpapakita rin na ang mga pakikipag-ugnayan sa mga protina na ito ay mahalaga para sa KSHV lytic replication. Ang Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) ay ang sanhi ng ahente ng ilang mga kanser sa tao.Ang KSHV ORF45 ay isang multifunctional na protina na kinakailangan para sa KSHV lytic replication, ngunit ang eksaktong mekanismo kung saan gumaganap ang ORF45 ng mga kritikal na function nito ay hindi malinaw.Ang aming mga nakaraang pag-aaral ay nagsiwalat na ang lahat ng ORF45 pr otein sa mga cell ay umiiral sa mga high-molecular-weight complex.Samakatuwid, hinahangad naming ilarawan ang interactome ng ORF45 upang magbigay ng mga insight sa mga tungkulin nito sa panahon ng lytic replication.Gamit ang isang panel ng monoclonal antibodies, sinuri namin ang ORF45 interactome sa mga cell na nahawaan ng KSHV.Nakilala namin ang dalawang bagong nagbubuklod na kasosyo ng ORF45: ang viral protein ORF33 at cellular ubiquitin-specific protease 7 (USP7).Ipinakita pa namin na ang pakikipag-ugnayan sa pagitan ng ORF45 at ORF33 ay mahalaga para sa mahusay na paggawa ng mga particle ng KSHV viral, na nagmumungkahi na ang naka-target na pagkagambala sa pakikipag-ugnay na ito ay maaaring kumatawan sa isang diskarte sa nobela upang mapigilan ang pagtitiklop ng KSHV lytic.