Mga produkto

Ang X-gal (pinaikling BCIG para sa 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) ay isang organic compound na binubuo ng galactose na naka-link sa isang substituted indole.Ang tambalan ay na-synthesize ni Jerome Horwitz at mga collaborator noong 1964. Ang pormal na pangalan ng kemikal ay madalas na pinaikli sa hindi gaanong tumpak ngunit hindi gaanong masalimuot na mga parirala tulad ng bromochloroindoxyl galactoside.Ang X mula sa indoxyl ay maaaring ang pinagmulan ng X sa X-gal contraction.Ang X-gal ay kadalasang ginagamit sa molecular biology upang subukan ang pagkakaroon ng isang enzyme, β-galactosidase, sa lugar ng karaniwan nitong target, isang β-galactoside.Ginagamit din ito upang makita ang aktibidad ng enzyme na ito sa histochemistry at bacteriology.Ang X-gal ay isa sa maraming indoxyl glycosides at ester na nagbubunga ng mga hindi matutunaw na asul na compound na katulad ng indigo dye bilang resulta ng enzyme-catalyzed hydrolysis.

Ang X-gal ay isang analog ng lactose, at samakatuwid ay maaaring ma-hydrolyzed ng β-galactosidase enzyme na pumuputol sa β-glycosidic bond sa D-lactose.Ang X-gal, kapag na-cleaved ng β-galactosidase, ay nagbubunga ng galactose at 5-bromo- 4-chloro-3-hydroxyindole - 1. Ang huli ay kusang nagdimerize at na-oxidize sa 5,5'-dibromo-4,4'-dichloro -indigo - 2, isang matinding asul na produkto na hindi matutunaw.Ang X-gal mismo ay walang kulay, kaya ang pagkakaroon ng asul na kulay na produkto ay maaaring gamitin bilang isang pagsubok para sa pagkakaroon ng aktibong β-galactosidase.Pinapayagan din nito ang bacterial β-galactosidase (tinatawag na lacZ ) na magamit bilang isang reporter sa iba't ibang aplikasyon.

Sa two-hybrid analysis, ang β-galactosidase ay maaaring gamitin bilang isang reporter upang matukoy ang mga protina na nakikipag-ugnayan sa isa't isa.Sa paraang ito, maaaring ma-screen ang mga genome library para sa pakikipag-ugnayan ng protina gamit ang yeast o bacterial system.Kung saan mayroong matagumpay na pakikipag-ugnayan sa pagitan ng mga protina na sinusuri, magreresulta ito sa pagbubuklod ng isang activation domain sa isang promoter.Kung ang promoter ay naka-link sa isang lacZ gene, ang paggawa ng β-galactosidase, na nagreresulta sa pagbuo ng mga blue-pigmented na kolonya sa pagkakaroon ng X-gal, ay magpahiwatig ng isang matagumpay na pakikipag-ugnayan sa pagitan ng mga protina.Ang diskarteng ito ay maaaring limitado sa pag-screen ng mga aklatan na mas mababa sa humigit-kumulang 106. Ang matagumpay na cleavage ng X-gal ay lumilikha din ng kapansin-pansing mabahong amoy dahil sa volatilization ng indole.

Dahil ang X-gal mismo ay walang kulay, ang pagkakaroon ng asul na kulay na produkto ay maaaring gamitin bilang isang pagsubok para sa pagkakaroon ng isang aktibong β-galactosidase.

Ang madaling pagkakakilanlan ng isang aktibong enzyme ay nagpapahintulot sa gene para sa βgalactosidase (ang lacZ gene) na magamit bilang isang reporter gene sa iba't ibang mga aplikasyon.