Mga produkto

Ang phosphorylation ng protina ay kinokontrol ang magkakaibang mga function ng cellular at gumaganap ng isang mahalagang papel sa maagang pag-unlad ng mga halaman.Upang makadagdag at mapalawak sa mga nakaraang pagsisiyasat ng protina phosphorylation sa Arabidopsis seedlings, gumamit kami ng alternatibong diskarte na pinagsasama ang pagkuha ng protina sa ilalim ng mga kondisyon na hindi nagde-denaturing na may immobilized metal-ion affinity chromatography (IMAC) na pagpapayaman ng intact phosphoproteins sa Rubisco-depleted extracts, na sinusundan ng pagkilala. gamit ang two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) at liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS).Ang in-gel trypsin digestion at pagsusuri ng mga napiling gel spot ay nakilala ang 144 phosphorylated peptides at residues, kung saan 18 phosphopeptides at 8 phosphosite lamang ang natagpuan sa PhosPhAt 4.0 at P3DB Arabidopsis thaliana phosphorylation site database.Mahigit sa kalahati ng 82 na natukoy na phosphoproteins ay kasangkot sa metabolismo ng carbohydrate, photosynthesis/respiration o oxidative stress response mechani sms.Ang pagpapayaman ng mga buo na phosphoproteins bago ang 2-DE at LC-MS/MS ay lilitaw upang mapahusay ang pagtuklas ng phosphorylated threonine at tyrosine residues kumpara sa mga pamamaraan na gumagamit ng peptide-level enrichment, na nagmumungkahi na ang dalawang diskarte ay medyo magkatugma sa mga tuntunin ng saklaw ng phosphorylation site.Ang paghahambing ng mga resulta para sa mga batang punla sa mga nakuha dati para sa mga mature na dahon ng Arabidopsis ay nakilala ang limang protina na naiiba ang phosphorylated sa mga tisyu na ito, na nagpapakita ng potensyal ng diskarteng ito para sa pagsisiyasat ng dinamika ng protina phosphorylation sa panahon ng pag-unlad ng halaman.