Mga produkto

Bagong high-performance liquid chromatography assay para sa glycosyltransferases batay sa derivatization na may anthranilic acid at fluorescence detection.

Ang mga assay ay binuo gamit ang natatanging labeling chemistry ng 2-aminobenzoic acid (2AA; anthranilic acid, AA) para sa pagsukat ng mga aktibidad ng parehong β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) at α2-6 sialyltransferase (ST-6) sa pamamagitan ng high-performance liquid chromatography (HPLC) na may fluorescence detection (Anumula KR. 2006. Mga advance sa fluorescence derivatization method para sa high-performance liquid chromatographic analysis ng glycoprotein carbohydrates. Anal Biochem. 350:1-23).Ang N-Acetylglucosamine (GlcNAc) at N-acetyllactosamine ay ginamit bilang mga acceptor at uridine diphosphate (UDP) -galactose at cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic acid (NANA) bilang mga donor para sa GalT-1 at ST-6, ayon sa pagkakabanggit.Ang mga produktong enzymatic ay may label na in situ na may AA at nahiwalay mula sa mga substrate sa TSKgel Amide 80 na haligi gamit ang mga kondisyon ng normal na yugto.Ang mga yunit ng enzyme ay natukoy mula sa mga peak na lugar sa pamamagitan ng paghahambing sa magkakatulad na derivatized na mga pamantayang Gal-β1-4GlcNAc at NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Naitatag ang linearity (konsentrasyon ng oras at enzyme), katumpakan (intra-at interassay) at reproducibility para sa mga assay.Ang mga assay ay natagpuan na kapaki-pakinabang sa pagsubaybay sa mga aktibidad ng enzyme sa panahon ng paghihiwalay at paglilinis.Ang mga assay ay lubos na sensitibo at gumanap na katumbas ng o mas mahusay kaysa sa tradisyonal na radioactive sugar-based na mga sukat.Ang format ng assay ay maaari ding gamitin para sa pagsukat ng aktibidad ng iba pang mga transferase, sa kondisyon na ang mga tumatanggap ng carbohydrate ay naglalaman ng pagbabawas ng dulo para sa pag-label.Ang isang assay para sa mga tumatanggap ng glycoprotein ay binuo gamit ang IgG.Ang isang maikling paraan ng pag-profile ng HPLC ay binuo para sa paghihiwalay ng mga IgG glycans (bintennary G0, G1, G2, mono- at disialylated), na pinadali ang pagpapasiya ng mga aktibidad ng GalT-1 at ST-6 sa mabilis na paraan.Higit pa rito, ang paraan ng profiling na ito ay dapat na mapatunayang kapaki-pakinabang para sa pagsubaybay sa mga pagbabago sa IgG glycans sa mga klinikal na setting.