Mga produkto

Ang mga eukaryotic cell ay naglalaman ng maselan na balanse ng mga minutong halaga ng apat na deoxyribonucleoside triphosphate (dNTPs), sapat lamang para sa ilang minuto ng pagtitiklop ng DNA.Ang parehong kakulangan at labis ng isang dNTP ay maaaring magresulta sa pagtaas ng mga rate ng mutation, maling pag-aayos ng DNA o pagkaubos ng mitochondrial DNA.Ang mga dNTP ay karaniwang binibilang ng isang enzymatic assay kung saan ang pagsasama ng radioactive dATP (o radioactive dTTP sa assay para sa dATP) sa mga tiyak na synthetic oligonucleotides ng isang DNA polymerase ay proporsyonal sa konsentrasyon ng hindi kilalang dNTP.Nalaman namin na ang karaniwang ginagamit na Klenow DNA polymerase ay maaaring palitan ang kaukulang ribonucleotide para sa hindi kilalang dNTP na humahantong sa ilang mga pagkakataon sa isang malaking overestimation ng mga dNTP.Inilalarawan namin ngayon ang mga kondisyon ng assay para sa bawat dNTP na umiiwas sa pagsasama ng ribonucleotide.Para sa dTTP at dATP assays ito ay sapat na upang mabawasan ang mga konsentrasyon ng Klenow enzyme at ng may label na dATP (o dTTP);para sa dCTP at dGTP kinailangan naming palitan ang Klenow enzyme ng alinman sa Taq DNA polymerase o Thermo Sequenase.Iminumungkahi namin na sa ilang mga naunang ulat ang pagsasama ng ribonucleotide ay maaaring nagdulot ng masyadong mataas na mga halaga para sa dGTP at dCTP.