Mga produkto

Upang partikular na mabilang ang ilang mga metabolite ng 5-fluorouracil (5-FU) at dalawang endogenous monophosphate nucleotides, bumuo kami ng isang orihinal na pamamaraan batay sa isang likidong chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS).Ang assay na ito ay nagpapahintulot sa pagpapasiya ng: (i) ang intracellular production ng 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) mula sa 5-FU o 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) ang epekto ng 5-FdUMP na konsentrasyon sa intracellular na 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) ratio, at (iii) ang lawak ng pagtatago ng 5-FdUMP at 5-FU mula sa human cultured cells ng mga ABC transporter.Sa ilalim ng aming mga pang-eksperimentong kondisyon, ang mga cell ay natupok ng 5-FU o 5-FUrd.Pagkatapos, ang mga cellular protein ay na-precipitate ng methanol.Ang pamamaraang ito ay nagbigay ng mataas na pagbawi sa pagkuha.Bilang karagdagan, upang masukat ang pagtatago ng 5-FU at 5-FdUMP mula sa mga cell, isinagawa namin ang dami ng mga molekulang ito sa medium ng kultura.Ang media ay direktang na-injected (5-FU) o sa ilalim ng solid phase extraction gamit ang Oasis Wax extraction cartridge (5-FdUMP).Ang paghihiwalay ng mga analytes ay isinagawa sa isang dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) na haligi na may isocratic mode gamit ang ammonium formate buffer/methanol/water (5/5/90, v/v) bilang mobile phase.Ang oras ng pagtakbo ay hindi lalampas sa 6.2 min.Ang mga analyte ay na-ionize sa isang electrospray interface sa ilalim ng negatibong ion mode.Napatunayan namin ang pamamaraan sa isang saklaw ng 2.5–150 ng mL −1 ayon sa mga compound.Ang pagkakaiba-iba ng intra-at inter-assay ay mas mababa sa 10% sa loob ng pitong araw.Ang lahat ng mga compound ay matatag sa mga cell o sa medium ng kultura kapag ang mga sample ay nakaimbak sa −20 ° C nang hindi bababa sa dalawang linggo, at pagkatapos ng tatlong freeze-thaw cycle.Walang epekto ng matrix ang naobserbahan sa parehong media.