Mga produkto

Monogalactopyranosides ng fluorescein at fluorescein methyl ester: synthesis, enzymatic hydrolysis sa pamamagitan ng biotnylated β-galactosidase, at pagpapasiya ng translational diffusion coefficient

Ang fluorescein monoglycosides (d-galactopyranoside (FMG) at d-glucopyranoside) at ang kanilang methyl ester (MFMG) ay inihanda mula sa acetobromoglucose/galactose at fluorescein methyl ester sa magandang ani.Ang mga eksperimento sa enzymatic hydrolysis (gamit ang biotinylated β-galactosidase) ng mga galacto derivative ay isinagawa at ang mga kinetic na parameter ay kinakalkula.Ang 15-20 beses na pagtaas ng intensity ng fluorescence ay naobserbahan sa panahon ng hydrolysis.Ang isang linear na pagtaas ng fluorescence ay napansin sa maikling panahon at mababang konsentrasyon ng substrate, na ginagawang kapaki-pakinabang at sensitibong mga probe ang mga compound na ito para sa galactosidases.Ang magnitude ng Michaelis-Menten constant (Km) na halaga para sa MFMG ay mas mataas kaysa sa FMG na nagmumungkahi ng posibleng pagbabago ng conformational ng fluorogenic substrate.Ang halaga ng km para sa biotinylated β-Gal na may FMG ay mas mababa kaysa sa para sa katutubong enzyme.Ang pagmamasid na ito ay nagpapahiwatig ng mas mataas na substrate affinity ng biotinylated enzyme kumpara sa katutubong enzyme.Ang mga koepisyent ng pagsasabog ng pagsasalin ay nasukat, para sa parehong mga fluorogenic na substrate at parehong mga produkto, na gumagamit ng fluorescence correlation spectroscopy.Ang mga koepisyent ng pagsasabog ng pagsasalin para sa mga fluorogenic na substrate at ang mga produktong enzymatic hydrolysis ay sinusukat na magkatulad, sa hanay na 3.5–4.5 × 10−10 m2 s−1.Kaya ang isang pagpapahusay o pagpapahina ng mga enzymatic kinetics dahil sa pagkakaiba sa translational mobility ng substrate at produkto ay hindi gaanong maliwanag.